免疫沉淀技术之染色质免疫共沉淀(ChIP)
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发布时间：2024-10-01 12:53
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时间：2024-10-31 01:45
ChIP实验原理类似于Co-IP，使用抗体富集特定蛋白与DNA复合物。首先，利用甲醛固定细胞，保留蛋白-DNA复合物。随后，通过超声或核酸酶随机切断DNA，形成一定长度的片段。接着，使用抗体结合并富集复合物，最后纯化、解联并检测得到的DNA片段。
ChIP实验流程大致如下：
1. 固定细胞（交联染色质）：使用1%甲醛溶液固定细胞，终止蛋白-DNA复合物的动态变化。固定时间需恰当，过长或过短均会影响实验结果。甘氨酸终止交联反应后，细胞可在-80℃保存。
2. 细胞裂解：固定后，裂解细胞以释放蛋白-DNA复合物。
3. 切断染色质：通过机械超声或核酸酶消化，获得平均大小为200-1000bp的染色质片段。这些片段在-80℃下可保存较长时间。
4. 免疫沉淀：将特定蛋白抗体固定在磁珠上，与蛋白-DNA复合物孵育，离心去上清后得到复合物。洗涤沉淀三次，去除非特异性结合。
5. 洗脱、富集蛋白-DNA复合物：使用洗脱缓冲液洗脱DNA，离心收集上清液。
6. 解交联、纯化DNA：去除蛋白与DNA交联，使用RNase A去除残余RNA。通过PCR纯化回收DNA。
7. 分析检测：纯化DNA通过ChIP-qPCR或ChIP-seq进行分析。qPCR针对已知靶基因区域，实现快速定量分析；ChIP-seq适用于不确定靶基因的情况，检测分析DNA片段。
ChIP实验流程至此结束，下期将深入探讨ChIP的相关内容。汉恒生物专注病毒包装多年，如有任何技术需求或问题，欢迎随时咨询。
参考文献：Collas P. The current state of chromatin immunoprecipitation. Mol Biotechnol. 2010 May;45(1):87-100. doi: 10.1007/s12033-009-9239-8.
