shRNA真核表达载体构建YRBIO-shRNA表达系统
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发布时间：2024-10-17 18:34
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时间：2024-11-01 17:08
在RNA干扰实验中，关键的步骤包括靶位点选择和shRNA表达载体构建。正确选择靶位点和高效构建载体能极大提升实验效果，反之则可能浪费资源。shRNA表达载体构建完成后，通常可以作为YRBIO腺病毒包装系统中的穿梭载体，对于转染效率低的细胞，可以直接采用这些载体包装腺病毒进行感染。
市面上的免费软件在靶位点选择和shRNA设计上效率较低，有效率仅约25%~30%。相比之下，商业化的软件和shRNA库，凭借其先进算法和合理设计原则，有效率可达75%以上。YRBIO系统引进了全球顶尖的TRC shRNA库，针对数万种基因提供3~5条高质量shRNA，总数超过五万，且大部分有效性超过75%，干扰效率超过70%以上，是实验的理想选择。
YRBIO系统以这个shRNA库为基础，为每个基因提供3~5条高质量shRNA序列，并构建到shRNA真核表达载体pYr系列中，如pYr-1.1-hU6-EGFP。只需确定目标基因，即可从数据库获取对应序列，选择合适的shRNA表达系统进行实验。系统提供hU6、mU6、hH1和h7SK等多种polIII型启动子选择，包括荧光标记和非标记载体，以及mirshRNA真核表达载体。
YRBIO-shRNA表达系统的优点在于：其shRNA序列源于成熟的国际数据库，保证了质量，干扰效率高；实验者可以灵活构建一条或多条shRNA；启动子类型丰富，适应不同实验需求；载体既可作为普通载体，也能作为腺病毒包装的穿梭载体，利用腺病毒的特性进行高效研究。右图展示了不带有荧光的shRNA真核表达载体pYr-2.1-hU6。
扩展资料
构建的shRNA真核表达载体或者mirshRNA真核表达载体，由于载体上均带有LR同源重组臂，所以这些载体均可作为YRBIO腺病毒包装系统中的穿梭载体使用。如果目的细胞质粒转染效率较低，则可直接以这些载体为基础包装腺病毒，利用腺病毒感染目的细胞。
