分光光度法基本原理及应用

发布网友发布时间：2024-10-22 10:48

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热心网友时间：2024-11-07 19:55

分光光度法是一种通过测量物质对特定波长光的选择性吸收来进行物质含量分析的实用技术。该方法主要包括紫外可见分光光度法和红外光谱法，前者利用200~780nm光谱，紫外区为200~400nm，可见区为400~780nm，而红外区则在2.5~1000um范围内。起源于早期的目视比色法，随着科技的进步，发展为更精确的光电比色法，并最终通过分光光度计实现了自动化测量，其核心原理是溶液颜色深浅与光吸收强度成反比。

分光光度法利用白光的混合特性，通过不同波长的光通过溶液，观察被吸收的光谱，形成光吸收曲线。例如，KMnO4溶液会吸收绿色光，呈现紫色。光吸收曲线的绘制有助于确定最大吸收波长，这在定量分析中至关重要。定量分析中，常见的方法包括工作曲线法（标准曲线）和对比法，通过绘制标准溶液的吸光度与浓度关系图，可以计算未知溶液的浓度，但需注意浓度高时可能偏离朗伯-比耳定律，需考虑非单色光、化学反应等因素的影响。

操作分光光度计时，需注意仪器清洁和比色池的选择，根据测定波长选择合适的玻璃或石英吸收池。实验室条件需控制在适宜的温度和湿度，远离电磁干扰，并确保仪器的防腐蚀和防日光照射。最后，对721型分光光度计的波长校正是通过镨汝滤光片法进行的，通过调整和测定，确保仪器的测量精度在允许范围内。