细胞爬片具体步骤是什么?

发布网友 发布时间：2024-12-13 10:33

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热心网友 时间：2024-12-16 11:20

细胞爬片的具体步骤如下：首先，对玻片进行预处理，包括用砂轮切割、用洗衣粉清洗、用水冲洗并烤干，随后浸泡在酸液中过夜，洗净并干燥，通过高压灭菌和烤箱处理后备用。爬片可以在培养皿、六孔板或24孔板中进行，我选择了培养皿，因为这既节省了经费，又便于操作。培养皿同样需要经过上述处理。

具体操作包括：用胰酶消化细胞，确保形成单细胞悬液。然后，取出消毒后的培养皿，加入少量培养基，将玻片放入，滴加单细胞悬液，最后盖上培养皿，在37度5%CO2的环境中培养，根据细胞生长状况适时取出。爬片在37度的PBS中清洗三次，每次3到5秒，然后在4%多聚甲醛中固定15分钟，用37度去离子水冲洗，注意动作要轻柔，避免掉片。

接下来，将做好的爬片晾干，用中性树胶粘在载玻片上，确保树胶完全干燥后再进行后续实验。细胞爬片可以保存在-20度，具体保存时间不确定，但建议尽早使用。

细胞免疫荧光的具体步骤为：4%多聚甲醛固定10分钟（用于固定细胞器时可使用预冷的70%甲醇+30%丙酮）；在PBS中漂洗5分钟；0.5% Triton穿孔15分钟（丙酮固定法无需进行透化处理）；再次在PBS中漂洗两次，每次5分钟；1%BSA封闭30分钟；加入1%BSA稀释的一抗，在37℃下杂交2小时；再次在PBS中漂洗两次，每次5分钟；加入1%BSA稀释的二抗，在37℃下杂交1小时；在PBS中再次漂洗两次，每次5分钟；使用5ug/ml DAPI染色2分钟；最后使用抗淬灭封片剂进行封片。

抗淬灭封片剂的成分包括2.5% DABCO (w/v)、50mM Tris (pH8.0) 和90%甘油。

热心网友 时间：2024-12-16 11:21

细胞爬片的具体步骤如下：首先，对玻片进行预处理，包括用砂轮切割、用洗衣粉清洗、用水冲洗并烤干，随后浸泡在酸液中过夜，洗净并干燥，通过高压灭菌和烤箱处理后备用。爬片可以在培养皿、六孔板或24孔板中进行，我选择了培养皿，因为这既节省了经费，又便于操作。培养皿同样需要经过上述处理。

具体操作包括：用胰酶消化细胞，确保形成单细胞悬液。然后，取出消毒后的培养皿，加入少量培养基，将玻片放入，滴加单细胞悬液，最后盖上培养皿，在37度5%CO2的环境中培养，根据细胞生长状况适时取出。爬片在37度的PBS中清洗三次，每次3到5秒，然后在4%多聚甲醛中固定15分钟，用37度去离子水冲洗，注意动作要轻柔，避免掉片。

接下来，将做好的爬片晾干，用中性树胶粘在载玻片上，确保树胶完全干燥后再进行后续实验。细胞爬片可以保存在-20度，具体保存时间不确定，但建议尽早使用。

细胞免疫荧光的具体步骤为：4%多聚甲醛固定10分钟（用于固定细胞器时可使用预冷的70%甲醇+30%丙酮）；在PBS中漂洗5分钟；0.5% Triton穿孔15分钟（丙酮固定法无需进行透化处理）；再次在PBS中漂洗两次，每次5分钟；1%BSA封闭30分钟；加入1%BSA稀释的一抗，在37℃下杂交2小时；再次在PBS中漂洗两次，每次5分钟；加入1%BSA稀释的二抗，在37℃下杂交1小时；在PBS中再次漂洗两次，每次5分钟；使用5ug/ml DAPI染色2分钟；最后使用抗淬灭封片剂进行封片。

抗淬灭封片剂的成分包括2.5% DABCO (w/v)、50mM Tris (pH8.0) 和90%甘油。