PCR与DNA分子克隆

发布网友发布时间：2022-05-07 21:44

共2个回答

热心网友时间：2022-07-01 14:03

这个有多方面的原理：
一个：PCR有错误，虽然这个错误率很低，普通的酶大概在千分之一，而高保真的在百万分之一，但毕竟有。
二个：基因保存的问题：PCR产物当然也可以保存，但保存时间长了会不会出问题？能保存几年？克隆进质粒就不一样了，这个基本可以保存很久，哪一天想要这个基因，拿出来摇一小瓶就可以了。
三个：单克隆性，PCR片断可能有长有短（还有突变），而质粒就不一样了，可以挑单克隆，测序正确后就认为这是我们想要的基因。
四个：做基因表达时连接方便。如果PCR产品上没有酶切位点，克隆载体上有，切下来可以连到表达载体上。
象有些人做基因库时，都是克隆到载体上，肯定是这样有很多优点的。

参考资料：http://www.bioyou.com/ProctShow.asp?ID=1039

热心网友时间：2022-07-01 14:04

转化质粒不止是为了扩增，
如果是表达宿主，可以重组表达蛋白质
或者质粒改变或增加了宿主的抗性
就测序的话，sanger法前几十个bp的信号不是很稳定，所以在质粒载体上，可以用通用引物承担这部分弱信号
如果是混合模板比如微生物群落，PCR产物就是混合物，需要做文库挑单克隆