影响质粒稳定性的因素?菌种保藏的最大问题是什么?

发布网友发布时间：2022-05-24 13:28

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热心网友时间：2023-10-15 12:27

质粒一般来说是很稳定的，我们常常会去找2年前发过货的质粒，找出来点完检测发现跟2年前一样亮，一点降解现象也没有；有时候找出3个月前发货的质粒就讲解的几乎没有了，根据我的经验
1.你抽提质粒的方法、过程、保存质粒的EP管，是否洁净、是否灭菌都会跟你质粒保存的时间由关系，这个是我们人为可以控制的，所以如果你想你的质粒保存久一点的话，你的EP管、你最后加入的双蒸水或TE(其实个人觉得加哪个区别不大，虽然我们SOP上开始写的双蒸水后来改成TE了)都要经过严格的灭菌，虽然我偶尔急了会拿没灭过的管子直接上也没见出过问题，但是一旦出了事你敢肯定跟管子没关系么？所以这里要严格。
2.反复冻融也能加快质粒的降解。其实我觉得还是核酸酶的问题反倒是冻融本身对质粒的稳定与否作用并不大，至少是没有蛋白那么明显。而反复冻融的话就意味着你在反复操作，而每一次操作都有带入核酸酶污染的可能，操作多了概率也就大，很容易理解吧。
3.再有一点就是质粒本身的问题。这就好比人与人之间是有差异的一样，人的体质不同导致对病毒的抵抗力也不一样。同理，有的质粒就是不稳定，刚刚抽提出来就雾蒙蒙的一片，除了换感受态重新抽提或是换抽提方法（只是个人认为会有用，没有验证过）之外确实别无他法，而有的质粒的稳定性会很好。还有就是插入的基因片段，也有造成原有质粒不稳定的可能。这点是我们无法改变的。
至于菌的话我们都是4°C保存，一般1个月以内没有问题，而2~3个月后菌会变黄，就不太好用了，这时候再去摇菌不一定能摇出来。这里的菌液是跟质粒有关系的，有的过2个星期就可能摇不出来菌了，你要摇的时间长了红色的绿色的都能摇出来，没人敢用。
至于很重要的菌（比如做感受态用的菌株）我们会分装然后-80°C保存，用的时候拿接种环挑一点出来然后放进去，这个方法很保险，要注意的就是：
1.要分装。
2.不要反复冻融。
对于菌种保存，这两点都很重要！
以上是我个人的经验，希望对你有帮助。