质粒pet28a怎样转染大肠杆菌e.coli
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发布时间：2022-05-25 12:49
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热心网友
时间：2023-10-29 21:17
这个过程应该称为转化，现在主要有热激和电转化两种方法。我给你一个热激的protocol
1、 制备含有Amp抗生素的LB平板。
2、 取一个1.5ml离心管，加入100μl感受态细胞悬液，置冰上：加入20ul质粒T+G(提取的质粒DNA稀释500X)，用移液器轻柔混匀。冰上静置20min。
3、 42℃水浴中热激90秒，然后迅速置冰上3~5min。整个过程不要振荡菌液。
4、 加入1ml LB液体培养基(不含抗生素)，混匀后37℃振荡培养(180rpm)1小时，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因。
5、 取100ul菌液，至含有抗生素Amp的LB固体培养基上，涂布均匀。
6、 待菌液被培养基吸收后，37℃倒置培养12~16小时，菌落生长良好而又未互相重叠时，取出。
7、 计算转化率
8、 统计每一个培养皿中的菌落数。
9、 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下：
10、 转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积;
11、 转化频率(转化子数/μg质粒DNA)=转化子总数/质粒DNA加入量(μg)
参考自生物帮http://www.bio1000.com/experiment/hesuan/180366.html
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