原位杂交技术中哪些步骤可以降低RNA和探针的非特异性结合

发布网友发布时间：2022-05-25 11:23

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热心网友时间：2023-10-09 10:54

这个问题问到点子上了，呵呵
比如：
1.浸入乙酸酐（acetic anhydride）和三乙醇胺（tri－ethanolamine）中以减低静电效应，减少探针对组织的非特异性背景染色。
2.将组织切片浸入预杂交液中可达到封闭非特异性杂交点的目的，从而减低背景染色。预杂交液和杂交液的区别在于前者不含探针和dextran sulphate。
3.杂交的温度和时间杂交的温度也是杂交成功与否的一个重要环节，大约在30～60℃之间，根据探针的种类不同，温度略有差异，杂交的时间如过短会造成杂交不完全，而过长则会增加非特异性染色。
4.杂交严格度（hybridization stringency）杂交条件的严格度（stringency）表示通过杂交及冲洗条件的选择对完全配对及不完全配对杂交体的鉴别程度。通过控制杂交温度、盐浓度等，可减弱非特异性杂交体的形成，提高杂交的特异性。
5.洗涤的条件如盐溶液的浓度、温度、洗涤次数和时间因核酸探针的类型和标记的种类不同而略有差异，一般遵循的共同原则是盐溶液浓度由高到低而温度由低到高。必须注意的是在漂洗的过程中，切勿使切片干燥。干燥的切片即使大量的溶液漂洗也很难减少非特异性结合，从而增强了背景染色。